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对ELISA法检测大便HpSA进行方法学评价

时间:2014-06-13 来源:未知 作者:小韩 本文字数:2912字
论文摘要

  幽门螺杆菌( Helicobacter pylori,简称 Hp) ,首先由巴里·马歇尔( Barry J. Marshall) 和罗宾·沃伦( J.Robin Warren) 二人发现,幽门螺杆菌感染是慢性胃炎的主要致病因素,还与消化性溃疡、胃癌的产生密切相关.Hp 检测方法很多,主要分为介入性和非介入性两类.介入性检测方法包括快速尿素酶试验( RUT) 、组织学检测法、病原菌培养和聚合酶链反应( PCR 技术) ; 非介入性检测方法包括尿素呼气试验(14C - UBT) 和血清学试验。ELISA 法检测大便 HpSA是近年来开展并逐渐推广的一种检测 Hp 的新方法,本课题以尿素酶试验和组织学检测法作为检测幽门螺杆菌的“金标准”,对 ELISA 法进行方法学评价。

  1 材料与方法
  
  1. 1 研究对象 2010 年 1 月 - 2012 年 12 月在开封市中心医院住院治疗的慢性胃炎患者 200 例,其中,男 120 例,女 80 例,年龄 20 岁 ~ 70 岁,平均 45 岁。患者 4 周内未服用铋剂、抗生素、H2 受体拮抗剂和质子泵抑制剂等对 Hp 检测有干扰的药物,排除胃、十二指肠手术史及全身性严重疾病。

  1. 2 仪器与试剂 美国宝特仪器有限公司生产的ELx800 全自动酶标仪; 幽门螺杆菌抗原检测试剂盒,由北京协和药业有限公司提供,批号: 3401036; 快速尿素酶试纸,由深圳养和生物科技有限公司生产;Warthin - Starry 染液,自配。

  1. 3 检测方法 患者用洁净干燥的专用容器留取大便 2 g ~3 g,立即放入 -20 ℃的冰箱备用,最好 24 h内测定。利用胃镜取胃窦处的组织两份: 一份涂片做组织学检查; 一份做快速尿酶试验。快速尿酶试验:

  胃窦组织块放在试纸上,5 min 内观察结果: 变红色为阳性,不变色为阴性。组织学检测: 先用福尔马林液固定组织,然后切片,Warthin - Starry 染色,镜检,幽门螺杆菌染成黑褐色,弧形,背景呈棕黄色。ELISA 法检测大便 HpSA: 检测前把试剂和标本从冰箱中取出,恢复至室温。取 400 μl 稀释液加入一洁净干燥的塑料试管内,取约0. 1 g 大便加入其中,充分混匀。准确吸取 100 μl 混悬液滴入抗体包被的板孔内,再加入酶标抗体液 2 滴,同时设阴阳性对照各一孔。室温下孵育1 h,在自动洗板机上洗板3 次,拍干,加入底物液2滴,室温下孵育 10 min,加入终止液 2 滴,混匀后在全自动酶标仪上读取吸光度 OD 值,设定波长 450 nm.

  判断标准: OD≥1. 50,阳性; OD≤1. 20,阴性; 1. 20<OD < 1. 50,中介,复查。1. 4 统计学处理 采用 SPSS 15. 0 统计软件对实验结果进行统计学处理,求出实验的准确率、阳性率、特异度和敏感度,并用 χ2检验比较两种实验方法阳性率的差异。

  2 结 果
  
  采用 ELISA 法和“金标准”法对 200 例慢性胃炎患者测定,ELISA 法的阳性率 77. 5%( 155/200) ,特异度 90% ( 45/50) ,敏感度 103% ( 155/150) ,准确率97. 5% ( 195 /200) ; “金标准”法阳性率 75% ( 150 /200) .二者阳性率差异不具有统计学意义 ( χ2=0. 36,P > 0. 05) ( 表 1) .
论文摘要
  
  3 讨 论
  
  自从 1982 年幽门螺杆菌被发现以来,人类对 Hp的研究和探索就没有间断过.幽门螺杆菌对人类的危害主要表现在三方面: 导致胃炎和胃溃疡; 引发胃癌; 引起顽固性口臭.有关研究证实,慢性活动性胃炎幽门螺杆菌的感染率占 95%; Hp 可以引起细胞过度增生,激活癌基因,导致基因突变,引发胃癌; Hp 也可以定居于口腔黏膜,产生尿素酶,分解口腔正常菌群产生的尿素,释放出氨,引起顽固性口臭。

  为了把 Hp 的危害降低到最小,应该早发现早治疗,诊断幽门螺杆菌感染的最好方法是将临床病情分析和实验室检查相结合.

  幽门螺杆菌的实验室检查方法有很多,包括介入性和非介入性两种,常用的有 RUT 法、组织学检测、细菌培养、UBT 法和血清抗体检查。每种方法各有其特点,细菌培养复杂费时,需要专门的实验室条件,但特异性高,可以做药敏试验和细菌学研究。UBT 法结果准确,操作简单,克服了细菌呈局灶性分布而造成RUT 法假阴性的不足,但 UBT 法处于临界值的结果不可靠。血清抗体检查主要用于流行病学调查,不同试剂盒测定结果存在一定差异,且与其他细菌抗原有交叉反应。RUT 法快速方便,结果准确,可在胃镜检查时取材,但结果受取材部位、组织块大小、菌量多少和环境温度影响。组织学检测、特异性和敏感性都很高,但不同染色方法间结果存在差异,步骤繁琐,费用较高。RUT 法和组织学检查,由于特异性高,准确可靠,被定为幽门螺杆菌实验室检查的“金标准”.

  ELISA 法检测大便 HpSA 是一种非介入性方法,美国胃肠病周会于 1997 年首先报道了该检测方法,它与14C - UBT 法有很多相同的优点,已经广泛被人们接受。它的检测原理是感染 Hp 的胃粘膜更新脱落,进入消化道,最后随粪便排出,大便中便有 Hp-SA 存在,通过酶标双抗体夹心法测定 HpSA,阳性即Hp 感染。铋剂、抗生素、H2 受体拮抗剂和质子泵抑制剂几乎不干扰测定结果。它又比14C - UBT 法具有更多的优点,14C 具有放射性,对人体有一定的危害;检测需要昂贵仪器,费用高,对呼气动作有特殊要求,儿童呼气常因达不到要求而影响结果,而 ELISA 法克服了14C - UBT 法的局限性。血清抗体检查的敏感度较高,但由于血清中的抗体含量与病情往往不同步,该方法不常用于临床诊断。ELISA 法的特异性和准确率不如“金标准”法,但“金标准”法为介入性方法,采集标本时需要胃镜操作,有一定的技术要求,也会给病人带来一定的痛苦和思想压力,特别是儿童,不配合时,操作难以进行。ELISA 法检测大便 HpSA 具有特异性强、敏感性高、准确可靠的优点,又由于它是非介入性方法,取材方便,没有痛苦,容易为病人所接受。美国胃肠病周会报道,ELISA 法的特异度和敏感度都在 90%以上,与本课题的结果相符; 上海中山医院的刘红春教授曾研究报道,ELISA 法特异度92. 1% ,敏感度 91. 7% ,准确率 91. 8% ,与本课题的结果也相符。

  另有报道,ELISA 法检测大便 HpSA 适合大面积的幽门螺杆菌的流行病学调查,特别适合于儿童、孕妇及体弱等不适合胃镜检查者,对疾病的预防和随访都是不错的选择; 可作为疗效观察的指标,感染彻底治愈后,4 d ~ 5 d 抗原检测即可为阴性; 也可以作为临床常规检测项目加以推广,协助胃病的诊断和治疗。

  参考文献
  
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